Taq DNA聚合酶（5u/uL）使用說(shuō)明書

發(fā)布時(shí)間：2017/11/14

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Taq DNA聚合酶(5U/μL)

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

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價(jià)格(元)

Taq DNA聚合酶(5U/μL)

D1010L1177

200 U

-20 ℃

產(chǎn)品描述

本制品是94kDa的耐熱性DNA聚合酶，是把Thermus aquaticus DNA Polymerase基因在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)后經(jīng)多次純化分離而得到的。它與天然Taq DNA聚合酶具有相同的功能。使用本制品擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物的3´端附有一個(gè)"A"堿基，因此可直接克隆于T載體中。配以Life-iLab*配方的5×反應(yīng)緩沖液（已添加Mg2+）可獲得更加理想的擴(kuò)增結(jié)果。

活性定義

在74℃條件下，30分鐘內(nèi)催化10nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量為一個(gè)單位。

產(chǎn)品特點(diǎn)

：以入DNA為模板，擴(kuò)增長(zhǎng)度可達(dá)8kb，可以擴(kuò)增≤4kb片段。

靈敏：可從0.05ng人基因組DNA模板中擴(kuò)增出特定基因片段。

高品質(zhì)：*Real Time PCR的實(shí)驗(yàn)要求。

*配方的5×Buffer：使PCR擴(kuò)增反應(yīng)更加穩(wěn)定、靈敏、。

產(chǎn)品用途

常規(guī)PCR鑒定；小片段目標(biāo)基因克隆；平端PCR產(chǎn)物加A；雙脫氧法測(cè)序；熒光定量PCR。

使用建議

使用本試劑擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物3´ 端有一突出"A"堿基，可直接克隆于T載體中。如需擴(kuò)增克隆較長(zhǎng)片段建議換用Pfu DNA聚合酶。當(dāng)擴(kuò)增大片段時(shí)，Taq酶的擴(kuò)增效率大大低于Taq Plus酶，在>4Kb片段的PCR擴(kuò)增中建議換用Taq Plus酶。

實(shí)用實(shí)例：

例1: 50μL擴(kuò)增體系中，以5ngλDNA 為模板，對(duì)500bp～6.0kb

的擴(kuò)增結(jié)果。

泳道M：1KB DNA Marker；

泳道1：0.5kb；泳道2：1.0kb；

泳道3：2.0kb；泳道4：3.0kb；

泳道5：4.0kb；泳道6：6.0kb；

例2: 50μL擴(kuò)增體系中，分別以50ng～0.05ng人基因組DNA為模

板，可對(duì)特定基因片段（380bp）進(jìn)行很好的擴(kuò)增。

泳道1：50ng；泳道2：5ng；

泳道3：0.5ng；泳道4：0.05ng；

泳道M：DNA Ladder 2000 Marker

產(chǎn)品包裝

組份	D1010L1177	D1010L1178
Taq DNA 聚合酶(5U/μL)	50μL	200μL
dNTPs混合液(各10mM)	200μL	1mL
5×Taq Buffer with Mg2+	2mL	10mL

運(yùn)輸和儲(chǔ)存

-20℃運(yùn)輸和保存，避免反復(fù)凍融，在保存條件下可保存1年。

質(zhì)量保證

經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE檢測(cè)僅可見清晰單一的目的條帶；PCR方法檢測(cè)無(wú)大腸桿菌DNA殘留，無(wú)核酸內(nèi)、外切酶污染。

常用反應(yīng)體系

常用PCR程序

5 x Taq Buffer

上游引物

下游引物

dNTPs(個(gè)10mM)

模板

Taq DNA聚合酶

ddH2O

10μL

0.2-1.0μM(終濃度)

1μL

1-50ng(質(zhì)粒)/10ng-1μg(基因組)

0.25μL(1.25U)

至50μL

擴(kuò)增片段<3k

擴(kuò)增片段≥3k

94℃ 90s

94℃ 20s

30次循環(huán) 57℃ 20s

72℃ 60s/kb

72℃ 5m

4℃ 保溫

94℃

30次循環(huán)

72℃

4℃

20s

94℃ 5s

68℃ 60s/kb

5min

保溫

注意事項(xiàng)使用方法

1、2mM Mg2+的終濃度可以滿足絕大多數(shù)PCR擴(kuò)增，對(duì)于某些PCR，為了保證較好的擴(kuò)增，可調(diào)節(jié)為2-4mM。

2、體系中加入推薦的酶量，可以滿足大多數(shù)PCR擴(kuò)增，對(duì)于某些PCR，為了得到較好的擴(kuò)增，可適當(dāng)增加酶量。

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