HotStart Taq DNA聚合酶使用說明書

發(fā)布時(shí)間：2017/11/14

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HotStart Taq DNA聚合酶

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	保存	價(jià)格(元)
HotStart Taq DNA聚合酶	D1010L1181	50μL	-20 ℃	395

產(chǎn)品描述

本制品是Taq經(jīng)特殊工藝處理后的制品，經(jīng)處理后的Taq酶在加熱至高溫前，其聚合酶活性被抑制，從而抑制低溫條件下由引物的非特異性退火或引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增。本制品適用于高特異性PCR反應(yīng)、Multiplex PCR、高GC含量（>60%），有二級(jí)結(jié)構(gòu)等有較強(qiáng)背景的基因組擴(kuò)增和大規(guī)模基因組擴(kuò)增檢測(cè)。

本產(chǎn)品經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE檢測(cè)僅見清晰單一條帶，PCR檢測(cè)無大腸桿菌DNA殘留，未發(fā)現(xiàn)核酸內(nèi)、外切酶活性。

活性定義

熱激活后，在74℃條件下，30分鐘內(nèi)催化10nmol dNTPs的摻入反應(yīng)為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量為一個(gè)單位(1U)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

簡便：無需改變常規(guī)熱啟動(dòng)酶PCR程序，可在所有正常PCR程序中實(shí)現(xiàn)熱啟動(dòng)PCR的效果。

：有效減少了雜帶及拖帶產(chǎn)生，從而實(shí)現(xiàn)高特異性的PCR。

靈敏：可從0.05ng人基因組DNA模板中擴(kuò)增出特定基因片段。

產(chǎn)品用途

高特異性PCR反應(yīng)；復(fù)雜模板擴(kuò)增；Multiplex PCR；基因組擴(kuò)增檢測(cè)；

使用建議

使用本試劑擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物3´ 端有一突出"A"堿基，可直接克隆于T-vector中。Mg2+濃度過高會(huì)產(chǎn)生非特異性條帶，但是如果做SYBRGreen熒光定量時(shí)，需增加0.5-2mM Mg2+

產(chǎn)品組份

組分	D1010L1181	D1010L1182
Hot Start Taq(5U/μL)	50 μL	5 x 50 μL
dNTPs混合液(各10mM)	200 μL	1 mL
5× HS Taq Buffer with Mg2+	2 x 1 mL	10 x 1 mL

運(yùn)輸和儲(chǔ)存

-20℃運(yùn)輸和保存，避免反復(fù)凍融，在保存條件下可保存1年。

使用方法

常用反應(yīng)體系

常用PCR程序

5 x HS Taq Buffer with Mg2+

上游引物

下游引物

dNTPs(個(gè)10mM)

模板

HotStart Taq DNA聚合酶

ddH2O

10μL

0.2-1.0μM(終濃度)

1μL

1-50ng

10ng-1μg

0.25μL(1.25U)

至50μL

擴(kuò)增片段<3k

94℃ 5分鐘

94℃ 5s

30次循環(huán) 57℃ 20s

72℃ 60s/kb

72℃ 5分鐘

4℃ 保溫

擴(kuò)增片段≥3k

94℃

30次循環(huán)

72℃

4℃

5分鐘

94℃ 5s

68℃ 60s/kb

5分鐘

保溫

注意事項(xiàng)

1. 體系中加入的推薦的酶量，可用于大多數(shù)PCR擴(kuò)增，對(duì)于某些PCR，若想得到的擴(kuò)增效果，可以適當(dāng)添加酶量。

2. 體系中Mg2+量（2mM）可滿足大部分PCR擴(kuò)增，對(duì)于特殊PCR反應(yīng)，可根據(jù)需要調(diào)整為2-4mM。

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