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技術文章
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蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶
2022-03-21
蛋白酶，顧名思義，降解蛋白的酶，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。在RNA提取中，蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶，防止RNA的降解。蛋白酶K廣泛應用于分子生物學，藥理學等科研方面。一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關的絲氨酸蛋白酶，具有很高的比活性。一般儲存在-20°C，避光防潮密閉干燥蛋白酶是所有能夠催化分解蛋白質(zhì)的酶類的統(tǒng)稱蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌中純化得到。該酶...
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介紹牛血清白蛋白常見的問題解決方法
2022-01-21
牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應液中，因為有些酶在低濃度下不穩(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后，它可能起到保護或載體作用，不少酶類添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對多數(shù)底物牛血清白蛋白而言，牛血清白蛋白可以使酶切更*，并可實現(xiàn)重復切割。在37℃，酶切反應超過1h時，牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定，因為在不含牛血清白蛋白的反應緩沖液中，許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時間。而BSA可以結合緩沖液或底物DNA中抑制限...
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外泌體通過分子信息傳遞扮演著重要的角色
2022-01-07
外泌體作為疾病診斷標志物的潛在應用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術突破，要將其用于臨床治療，外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)面臨很大的挑戰(zhàn)。外泌體（exosome）是細胞分泌囊泡（extracellularvesicles）的一種亞型，存在于生物體液中，并參與多種生理和病理過程。外泌體被認為是細胞間通信的一種新機制，允許細胞交換蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和遺傳物質(zhì)。過去，細胞分泌的外泌體一度被認為只是參與廢物排泄；現(xiàn)在，隨著高通量蛋白質(zhì)組學和基因組學的發(fā)展，外泌體被廣泛認為是生物體內(nèi)細胞間短距...
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介紹細胞凋亡形態(tài)學的幾種檢測方法
2021-11-28
細胞凋亡與壞死是兩種*不同的細胞凋亡形式，根據(jù)死亡細胞在形態(tài)學、生物化學和分子生物學上的差別，可以將二者區(qū)別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多，下面介紹幾種常用的測定方法。根據(jù)凋亡細胞固有的形態(tài)特征，人們已經(jīng)設計了許多不同的細胞凋亡形態(tài)學檢測方法。1、光學顯微鏡和倒置顯微鏡（1）未染色細胞：凋亡細胞的體積變小、變形，細胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。（2）染色細胞：常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、...
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外泌體的提取主要包括以下幾種方式
2021-11-25
外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載...
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蛋白酶K的配制標準及保存方法
2021-10-26
蛋白酶K廣泛應用于分子生物學,藥理學等科研方面.一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關的絲氨酸蛋白酶,具有很高的比活性.一般儲存在-20°C,避光防潮密閉干燥。蛋白酶Ｋ主要應用于基因檢測中基因抽取，是檢測試劑盒生產(chǎn)的重要原料，蛋白酶K產(chǎn)品由于在尿素和SDS中仍然具有降解天然蛋白質(zhì)的能力，因而被廣泛應用于制備脈沖電泳的染色體DNA，以及去除DNA和RNA中的核酸酶。現(xiàn)有基因抽提及檢測試劑盒中均需配備該酶。蛋白酶K配制標準：20mg/ml蛋白酶K配制標準(proteinaseK)：將2...
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使用CCK-8要注意的事項有哪些
2021-10-25
CellCountingKit-8（簡稱CCK8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。相信做細胞的同學對他都很熟悉，你確定你使用CCK-8試劑的方式是*正確的嗎？使用CCK-8要注意的事項有哪些：1.酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。2.CCK8可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染，以免影響結果。3.當在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時，培養(yǎng)板最外一圈的孔最容易干燥揮發(fā)，由于體積不準確而增加誤...
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胎牛血清與新生牛血清在蛋白組成上的差異有哪些
2021-09-26
胎牛血清（FetalBovineSerum,FBS）是在屠宰懷孕母牛的時候，通過心臟穿刺采取胎牛血獲取的血清，因其未與外界環(huán)境接觸，所以血清內(nèi)IgG等免疫因子相對含量較少，適合用于免疫類細胞的培養(yǎng)。胎牛血清與新生牛血清在蛋白組成上的差異還是很明顯的。首先，胎牛血清總蛋白含量（g/dl）約為2%-4%,新生牛血清約為3.0%-5.0%,成牛血清則高達8%-10%.從蛋白含量上也可以初步判斷一個血清是否為胎牛或新生牛血清，蛋白含量越高說明牛齡越大，目前檢測蛋白含量是初步檢測一項重...
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