Quick Cell支原體去除/預(yù)防試劑盒使用說明書

Quick Cell支原體去除/預(yù)防試劑盒

訂購(gòu)信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

支原體（Mycoplasma）是一種沒有細(xì)胞壁的原核生物，大小約0.1 - 0.6微米。目前，已發(fā)現(xiàn)的支原體品種有100多種。 由于支原體直徑較小，經(jīng)常可以穿過實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的0.20微米孔徑的除菌濾膜，高壓過濾時(shí)，甚至可以穿過0.10微米孔徑的除菌濾膜，造成細(xì)胞的支原體污染。本公司開發(fā)的支原體清除試劑Ⅰ含有抑制支原體蛋白質(zhì)合成的藥物，而支原體清除試劑Ⅱ含有抑制支原體DNA合成的藥物。由于兩種試劑的作用機(jī)理不同，支原體清除試劑Ⅰ需要處理不少于15天，而支原體清除試劑Ⅱ只需處理7天。兩者都可以達(dá)到*殺滅和清除支原體的目的。大約5-10%的支原體會(huì)對(duì)Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ或Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ產(chǎn)生抗性，此外，也有3-5%左右的細(xì)胞會(huì)在殺滅支原體的過程中死亡，由于上述兩個(gè)原因，我們一般建議同時(shí)購(gòu)買兩種支原體清除試劑，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被污染，可以將細(xì)胞分成兩份，分別用Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ和Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ同時(shí)進(jìn)行殺滅，這樣支原體對(duì)兩種藥物同時(shí)產(chǎn)生抗性和處理過程中細(xì)胞同時(shí)死亡的概率會(huì)非常低。

試劑盒組成

       Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ              1.0 mL (1000×)

       Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ              1.0 mL (1000×)

運(yùn)輸和儲(chǔ)存

      常溫運(yùn)輸，-20 ℃保存，可以保存2年。

使用方法

（一）Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ

1. 使用之前，先將Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ用PBS或者無血清培養(yǎng)液稀釋10倍后，放4℃冰箱保存。

2. 將50-100萬個(gè)細(xì)胞鋪到60 mm的細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，加入4 mL含Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ的正常細(xì)胞培養(yǎng)液（使用稀釋10倍后的Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ，按1:100比例加入）。

3. 每2-3天更換細(xì)胞培養(yǎng)液，加入新鮮的含Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ的正常細(xì)胞培養(yǎng)液。期間如果細(xì)胞密度過大，請(qǐng)保持細(xì)胞密度適當(dāng)（貼壁細(xì)胞可能需要胰酶消化），并更換新的培養(yǎng)皿。

4. 處理15天后，可以用支原體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)支原體是否殺滅*。如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理6天。

5. 以后每隔1個(gè)月進(jìn)行支原體的常規(guī)檢測(cè)，以保證沒有新的支原體污染。

（二）Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ

1. 使用之前，先將Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ（注意：支原體清除試劑Ⅱ在-20 ℃保存后，解凍時(shí)可能會(huì)有細(xì)小的結(jié)晶析出）用PBS或者無血清培養(yǎng)液稀釋10倍后，（支原體清除試劑Ⅱ可以*溶解，放4℃冰箱保存。

2. 將50-100萬個(gè)細(xì)胞鋪到60 mm的細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，加入4 mL含Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ的正常細(xì)胞培養(yǎng)液（使用稀釋10倍后的Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ，按1:100比例加入）。

3. 每天更換細(xì)胞培養(yǎng)液，加入新鮮的含Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ的正常細(xì)胞培養(yǎng)液。期間如果細(xì)胞密度過大，請(qǐng)保持細(xì)胞密度適當(dāng)（貼壁細(xì)胞可能需要胰酶消化），并更換新的培養(yǎng)皿。

4. 處理7天后，可以用支原體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)支原體是否殺滅*。如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理3天。

5. 以后每隔1個(gè)月進(jìn)行支原體的常規(guī)檢測(cè)，以保證沒有新的支原體污染。

注意事項(xiàng)

      1. 建議將細(xì)胞分成兩份，分別用Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ和Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ同時(shí)進(jìn)行殺滅，這樣支原體對(duì)兩種藥物同時(shí)產(chǎn)生抗性和處理過程中細(xì)胞同時(shí)死亡的概率會(huì)非常低。如果單獨(dú)使用一種清除試劑的話，萬一發(fā)現(xiàn)細(xì)胞對(duì)其中一種清除試劑有抗性或者細(xì)胞在處理過程中死亡，又要再花7-15天的時(shí)間嘗試另外一種清除試劑的效果。

      2. 處理過程中，注意每天觀察細(xì)胞的狀況，如果發(fā)現(xiàn)支原體清除試劑對(duì)細(xì)胞的毒性較大，可以加大培養(yǎng)液中的血清濃度或者提高細(xì)胞的密度。

      3. Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ和Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ在降低濃度后（使用稀釋10倍后的Quick Cell支原體支原體清除試劑Ⅰ或者Ⅱ，按1:500比例加入）也可以加入到培養(yǎng)液中作為短期（1-2個(gè)月）的支原體污染預(yù)防藥物，但是不建議在細(xì)胞培養(yǎng)液中長(zhǎng)期（超過2個(gè)月）加入，因?yàn)橛锌赡軐?dǎo)致對(duì)該兩種藥物有抗性的支原體出現(xiàn)。

Quick Cell支原體清除試劑的效果圖：左側(cè)為未經(jīng)支原體清除試劑處理的人Hela細(xì)胞,經(jīng)DAPI染色后，除了細(xì)胞核為藍(lán)色外，細(xì)胞質(zhì)也有大量的絮狀核酸物質(zhì)被染成藍(lán)色，這些處于細(xì)胞質(zhì)的核酸物質(zhì)就是支原體DNA。而右側(cè)為經(jīng)過本公司的支原體清除試劑Ⅱ處理7天的Hela細(xì)胞，經(jīng)DAPI染色后，除了細(xì)胞核為藍(lán)色外，細(xì)胞質(zhì)沒有任何絮狀核酸物質(zhì)被染成藍(lán)色，說明支原體已經(jīng)被清除。

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