基因組DNA提取原理說明

　　DNA是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子，是分子生物學研究的主要對象。所以基因組DNA提取實驗是分子生物學最基本實驗之一。 今天若重介紹基因組DNA提取的原理。在接下來的時間了還會介紹動物基因組DNA的提取步驟。

 

　　DNA. RNA和核苷酸都是極性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機溶劑，它們的鈉鹽比游離酸易溶于水，RNA鈉鹽在水中溶解度可達40g/L. DNA在水中為10g/L,呈黏性膠體溶液。

 

　　在酸性溶液中，DNA天然狀態(tài)的DNA是以脫氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于細胞核中。要從細胞中提取DNA時，先把DNP抽提出來,再把P除去，再除去細胞中的糖，RNA及無機離子等，從中分離DNA。DNP和RNP在鹽溶液中的溶解度受 鹽濃度的影響而不同。DNP在低濃度鹽溶液中，幾乎不溶解，如在0.14 mol/L的氣化鈉溶解度低，僅為在水中溶解度的1%，隨著鹽濃度的增加溶解度也增加，至1molL氯化鈉中的溶解度很大,比純水高2倍。RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響較小，在0.14mo/ 氯化鈉中溶解度較大。因此，在提取時，常用此法分離這兩種核蛋白。

 

　　苯酚氨仿作為蛋白變性劑，同時抑制了DNase的降解作用。用苯酚處理勻漿液時，由于蛋白與DNA聯(lián)結鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層,多次重復操作，再合并含DNA的水相,利用核酸不溶于醇的性質，用乙醇沉淀DNA。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態(tài)，真核細胞DNA的分離通常是在EDTA及SDS-類去污劑存在下，用蛋白酶K消化細胞獲得。